• Titulo

    Estudio de la plataforma de señalización en linfocitos T de pacientes infectados con el virus de la hepatitis B
  • Autor (es) / Colaborador(es)

    Luisa Elena Barboza Carrillo / Lisbeth Berrueta Carrillo / Luisana Avilán / Ana María Blasini
  • Institución

    Universidad de Los Andes - Facultad de Ciencias - Postgrado en Biología Celular
  • Tipo Documento

    Tesis doctoral
  • Resumen

    Español

    La Hepatitis B es considerada un problema de salud pública mundial. La persistencia de la infección, sumada a una respuesta inmune anti-viral ineficiente, pero responsable del daño tisular, puede conducir a cronicidad. Se han realizado esfuerzos importantes para comprender los mecanismos que controlan la activación de la respuesta inmune adaptativa anti-viral, abordando aspectos inherentes a la diferenciación funcional de linfocitos T, pilar fundamental de la respuesta inmune. Dentro de estos estudios, destaca la descripción de un microambiente inmunosupresor, como marco para persistencia de la infección. Comprender la cascada de señalización intracelular en los linfocitos T de pacientes con hepatitis B crónica, contribuirá a profundizar en los mecanismos que controlan el destino de la respuesta inmune. En este trabajo se utilizaron herramientas bioquímicas, citometría de flujo e inmunofluorescencia, para analizar la formación de las balsas lipídicas y las señales iniciales de activación responsables de la diferenciación de poblaciones linfocitarias en pacientes infectados crónicos, comparado con lo observado en pacientes que limitan la infección. Observándose en los pacientes infectados crónicos: 1) disminución en la formación de conglomerados lipídicos en la membrana de los linfocitos T, 2) Reclutamiento post-estimulo deficiente de las proteínas CD3ζ, ZAP- 70 y GRB2 hacia las balsas lipídicas, lo cual pudo comprobarse mediante inmunofluorescencia, 3) demostrándose además que estas proteínas no convergen con el GM1 en las balsas lipídicas en células estimuladas con HBcAg mas anticuerpos anti-CD28. Finalmente, se demostró mediante ensayos de inmunoprecipitación, que la molecula ZAP-70 no se asocia a CD3ζ en respuesta a la estimulación, probablemente secundario a fosforilación deficiente en residuos de tirosina. Estos resultados muestran por primera vez alteraciones importantes en procesos iniciales clave en la activación de los linfocitos T, en pacientes infectados crónicos, que pudieran no solo condicionar la respuesta tolerogénica, sino además revelar nuevos potenciales blancos terapéuticos para controlar la infección.


    Inglés

    Hepatitis B is considered to be a public health problem worldwide. Infection persistence next to an inefficient anti-viral immune response, yet responsible of tissue damage, may evolve into chronic disease. Important efforts to understand the mechanisms that control the activation of adaptive immune response, have been conducted, which involve those regarding functional differentiation of T cell populations, keystone in immune response. An immunosupresor microenvironment has been described as the hallmark for viral persistence during chronic hepatitis B. To understand the intracellular signaling cascade in T lymphocytes from HBV infected patients, will contribute to unravel the mechanisms that control the immune response outcome. In this work, biochemical, flow cytometry and immunofluorescence techniques have been used to analyze lipid rafts formation and the early activation signals responsible for lymphocytes functional differentiation in chronically HBV infected patients, compared to the results observed in a group of naturally immune subjects. Chronically infected patients show: 1) diminished lipid rafts accumulates in T lymphocytes, 2) A deficient lipid rafts recruitment of CD3ζ, ZAP-70 y GRB2 following stimulation, demonstrated by immunofluorescence as well, and 3) that these proteins do not merge with GM1 within the lipid rafts in cells stimulated with HBcAg and anti-CD28 antibodies. Finally, immunoprecipitation assays proved that following stimulation of lymphocytes, ZAP-70 does not associate to CD3ζ, perhaps secondary to a deficient tyrosine phosphorilation. These results show for the first time important defects regarding early key events in T cell activation, from chronically infected HBV patients, which may contribute not only to understand immune tolerance, but to reveal new potential therapeutic targets to control the infection.