• Titulo

    Determinación de algunos parámetros en el diagnostico de resistencia al virus de la mancha anular de la lechosa en plantas descendientes de Carica papaya L. transgénicas
  • Autor (es) / Colaborador(es)

    Carlos Andrés Vilera Calzada / María Eugenia Marquina / Manuel Dagert Boyer / María T. Vielma A.
  • Institución

    Universidad de Los Andes - Facultad de Ciencias - Departamento de Biología
  • Tipo Documento

    Trabajo especial de grado
  • Resumen

    Inglés

    The main objetive of this work was the evaluation of a sample of descendants of Carica papaya L. transgenic for a version of coat protein gene (cp) of the papaya ringspot virus ( PRSV ) . It was expected that this transformation conferred resistanse the virus. The behavior of cp as far as its prescense in the plants and its expression was evaluated by comparing it with the behavior of the cotransforming marker nptII, that confer resistance to kanamicin. The plants were between 6 and 8 months old. This plants were inoculated with the virus under controlled environmental conditions during a period of 6 months. In some of the plants, resistance to the virus was observed, this conduced us to assume that they recived the marker cp by segregation. Our assumption was corroborated by detection of cp sequences for dot blotting and sounthern blotting. Resistant phenotype was constantly observed even after the a new inoculation of the virus on plants. One of plants, which represents 7,14% out of the total sample, even though it received the marker was not resistant to the virus. Among the rest of the plants were observed a good correlation between the resistance to the PRSV and the cp gene presence. The gene nptII showed great instability and it was no possible to detect its activity in any plant; neither the codification of recombinant protein NPTII, determined by ELISA, nor the expression of the resistance in vivo. The cause of instability was mainly due to the loss of the transgene sequences demonstrated whith the dot blotting test.


    Español

    El presente trabajo tuvo por finalidad la evaluación de una muestra de descendientes de Carica papaya L. transgénicas para una versión del gen de la proteína de la capsidie ( cp ) del virus de la mancha anular de la lechosa ( PRSV ). Se esperaba que esta transformación confiriera resistencia al virus. Se evaluó el comportamiento de cp en cuanto a la permanencia en las plantas y en cuanto a expresión comparándolo con el comportamiento de el marcador cotransformante nptII que confiere resistencia a Km. Las evaluaciones se realizaron sobre plantas de edad comprendida entre 6 y 8 meses, inoculadas con el virus en condiciones de invernadero durante un periodo de 6 meses. En algunas de las plantas de la muestra se observó resistencia al virus asumiéndose que habrían recibido el marcador cp por segregación, esto pudo ser demostrado por la detección de la secuencia cp por medio de southern blotting y dot blotting en aquellas plantas resistentes al virus. La secuencia cp se mantuvo integrada al genoma de las plantas que lo recibieron durante todo el período de pruebas y de la misma manera la expresión fue constante observándose el mantenimiento del fenotipo resistente luego de la reinoculación de las plantas con el virus. En una de las plantas de la muestra, que representa el 7,14% del total de plantas que recibieron el marcador, aunque recibió el marcador no fue resistente al virus; en las restantes se observó una estrecha correlación entre la resistencia a virus y la presencia del marcador cp. El gen nptII, mostró gran inestabilidad y no se pudo observar su actividad en ninguna de las plantas; ni en cuanto a la codificación de la proteína recombinante NPTII determinada por ELISA ni en cuanto a la expresión de la resistencia a Km, determinada por un ensayo de resistencia in vivo. La causa de esta inestabilidad obedeció en la mayoría de los casos, a la pérdida de las secuencias de este transgen como se demostró con la hibridación dot blotting con una sonda específica.